Guanidine hýdróklóríð er ekki aðeins millistig í lífrænum efnasamböndum eins og lyfjum, skordýraeitri og litarefnum, heldur einnig sterkum denaturing lyf sem notað er í RNA útdráttartilraunum úr frumum til að denata og endurmeta prótein. Þessi grein dregur saman hlutverk guanidínhýdróklóríðs í próteinafræðingu og endurfyllingu.
1. Guanidine hýdróklóríð getur afneitað prótein.
Prótein hafa auðveldlega áhrif á ytri þætti eins og hitastig og denaturing lyf, sem leiðir til breytinga á sköpulagi, virkni tapi og óeðlilegum breytingum á eðlisfræðilegum og efnafræðilegum eiginleikum. Þetta ferli er kallað prótein denaturation. Guanidine hýdróklóríð er mikilvægt denaturing umboðsmaður sem getur valdið sterkum denaturation áhrifum, þar með talið tveimur denaturation aðferðum.
Eitt er leysingaráhrif guanidínhýdróklóríðs á vatnsfælna amínósýruleifar. Guanidínhýdróklóríð getur brotið vetnistengi í próteinbyggingu, aukið leysni ópólasameinda sem innihalda amínósýru hliðarkeðjur og dregið úr vatnsfælnum milliverkunum. Annar fyrirkomulag er að denatured prótein geta ákjósanlega bundið við guanidín hýdróklóríð til að mynda denatured prótein denaturing miðilsfléttur. Eftir að flétturnar hafa verið fjarlægðar færist viðbragðsjafnvægið til hægri og náttúrulegt ástand próteinsins verður flókið, sem leiðir að lokum til fullkominnar afneitunar próteinsins. Samt sem áður er bindingin á milli denaturing lyfja og denatured próteina mjög veik og aðeins mikill styrkur denaturing lyfja getur valdið fullkominni denaturation próteina. Almennt séð er denaturation af völdum guanidínhýdróklóríðs venjulega afturkræf.
2.. Prótein endurupptöku og upplausn próteina.
Þegar denaturation skilyrðin eru alvarleg og viðvarandi er prótein denaturation óafturkræf. Eftir að hafa fjarlægt denaturation þætti sumra denaturaðra próteina geta þau sjálfkrafa snúið aftur í náttúrulegt ástand, sem kallast endurfæðing próteina. Í því ferli að endurfella prótein er fyrsta skrefið að leysa próteinið sem inniheldur. Sem inniheldur prótein vísar til próteins sem tjáð er með bakteríum sem samanstendur af í frumum og myndar óvirkar fastar agnir án fösts lögunar, og er ekki vatnsleysanlegt, aðeins leysanlegt í denaturing lyfjum eins og þvagefni og guanidínhýdróklóríði.
Síðan, með því að fjarlægja denaturing umboðsmanninn hægt, er markpróteinið endurreist úr fullkomlega útbreiddu ástandi þess að venjulegu brotnu uppbyggingu þess, en fjarlægja afoxunarefnið gerir ráð fyrir eðlilegri myndun disulfide bindinga. Almennt byrjar endurfyllingarferlið guanidínhýdróklóríðs við 4m og endar á 1,5 m. Það eru mismunandi aðferðir á eftirfarandi hátt:
Þynning og endurnýjun: Bætið við vatni eða jafnalausn beint til að þynna lausnina og láta hana sitja yfir nótt til að fella próteinið. Ókosturinn er sá að rúmmálið eykst og þynningarhlutfall denaturing umboðsmanns er of hratt, sem gerir það erfitt að stjórna. Skilun eða síun endurnýjun: Denaturing umboðsmaðurinn er lítið sameindarefni sem kemst smám saman inn í porous himnuna við skilun eða síun. Kosturinn við styrk denaturing lyfsins sem minnkar smám saman í denaturing próteinlausninni er að það eykur ekki rúmmálið. Hægt er að stjórna flutningshlutfalli denaturing lyfsins með því að draga smám saman úr styrk ytri gegndræpi, en ferlið er hægt og krefst tíma. Renaturation á dálki: Endurnýting er náð í litskiljunarferlinu, sem er nýlega rannsökuð og beitt aðferð í framleiðslu. Kosturinn er sá að litskiljun hefur litla aðsogsgetu fyrir denatured prótein, sem getur bætt gæði endurfyllingar og virkni ávöxtunar. Á sama tíma getur það aðgreint markprótein og óhreinindi, náð hreinsunarmarkmiðum og endurheimt denatured umboðsmenn auðveldlega.
Prótein eru lífmólýldir sem tengjast lífinu, nauðsynleg efni til að viðhalda eðlilegri virkni lifandi lífvera og einnig annarri kynslóðalífs arfleifð. Hinar ýmsu rannsóknir á próteinum eru einnig áhugasöm fyrir fólk og skipulagsrannsóknir þeirra skipta sköpum fyrir framfarir í læknisfræði. Denaturation eða Refolding próteina er eitt af meginatriðum í rannsóknum á lífvísindum. Meðal þeirra getur denaturing umboðsmaðurinn guanidine hýdróklóríð afneitað prótein, sem gerir það auðvelt að rannsaka uppbyggingu þeirra. Meðan á endurskipulagningunni stendur getur það leyst próteinin í líkamanum og gegnir ómissandi hlutverki í rannsóknum á lífvísindum.